Lewat perjanjian tersebut, Portugis dan Spanyol sepakat membagi dunia menjadi dua bagian dengan garis demarkasi/khayal yang membentang dari Kutub Utara ke Kutub Selatan.
Daerah di sisi barat garis adalah kekuasaan Spanyol, sementara Portugis di sisi timur.
Karena itulah dalam melakukan penjelajahan samudra bangsa Portugis menempuh jalur timur, lewat pantai barat Afrika sampai ke Tanjung Harapan, kemudian menyusuri pantai timur Afrika menuju ke Kalikut, India.
Pangeran Henry the Navigator, putra Raja Portugis, menjadi salah satu tokoh yang sedari awal berhasrat besar untuk memajukan dunia pelayaran di negerinya.
Beberapa pelaut bangsa Portugis yang kemudian dikenal memelopori penjelajahan samudra adalah Bartholomeu Diaz, Vasco da Gama, Afonso d’alburquerque, dan Franciscus Xaverius.
Berikut kronologi penjelajahan samudra oleh bangsa Portugis:
1412 — Pangeran Henry the Navigator, memerintahkan ekspedisi pertama ke Pantai Afrika dan Kepulauan Canary.
1455 — Banteng kepausan Romanus Pontifex membenarkan penjelajahan Portugis dan menyatakan bahwa semua daratan dan perairan di selatan Bojador dan Cape Chaunar adalah milik raja-raja Portugal.
1471 — João de Santarém dan Pedro Escobar melintasi Khatulistiwa dan menemukan belahan Bumi Selatan.
1488 — Bartolomeu Dias berhasil mencapai Tanjung Harapan dan memasuki Samudra Hindia.
1495 — Perjalanan João Fernandes dan Pedro Barcelos ke Greenland.
1498 — Vasco da Gama memimpin armada untuk merintis jalan yang pernah ditempuh Bartolomeu Dias menyusuri pantai timur Afrika dan berhasil sampai di Calicut, India.